分 離(lí) 純 化(huà)

檢碩科(kē)學(xué)器材(cái)（上海(hǎi)）有(yǒu)限公(gōng)司

含有(yǒu)一種以(yǐ)上(shàng)的(dí)微生物培(péi)養物(wù)稱(chēng)為(wéi)混和培養(yǎng)物(wù)（mixed culture）。如(rú)果在一個菌落中(zhōng)所(suǒ)有細胞(bāo)均(jūn)來自於一個親代細(xì)胞，那(nà)麼(mó)這(zhè)個菌落(là)稱為純培養（pureculture）。在(zài)進(jìn)行菌(jūn)種(zhǒng)鑒(jiàn)定(dìng)時(shí)，所(suǒ)用的微生物(wù)一般均要求(qiú)為純(chún)的(dí)培(péi)養物。得到(dào)純(chún)培養的過程稱為(wéi)分離純化，方法有許多種(zhǒng)。

１，傾(qīng)注平(píng)板法

首(shǒu)先(xiān)把微(wēi)生物懸(xuán)液通過一係(xì)列(liè)稀(xī)釋，取一定量(liáng)的稀(xī)釋(shì)液(yè)與熔(róng)化(huà)好(hǎo)的保持(chí)在40-50°左(zuǒ)右的營(yíng)養瓊(qióng)脂(zhī)培養基充分(fēn)混合(hé)，然(rán)後(hòu)把(bǎ)這(zhè)混合液傾(qīng)注到無(wú)菌的(dí)培養皿中(zhōng)，待凝固之後(hòu)，把(bǎ)這(zhè)平板(bǎn)倒置在(zài)恒(héng)箱(xiāng)中(zhōng)培(péi)養。單(dān)一(yī)細胞經過多(duō)次增殖後形(xíng)成一(yī)個(gè)菌落，取單(dān)個菌落製成(chéng)懸(xuán)液(yè)，重(zhòng)復上述步驟數次，便可得到(dào)純培養物(wù)。

２，塗布平板(bǎn)法

首(shǒu)先(xiān)把(bǎ)微(wēi)生(shēng)物(wù)懸液(yè)通過適當的稀(xī)釋，取(qǔ)一(yī)定量(liáng)的稀釋(shì)液放在(zài)無菌(jūn)的已(yǐ)經凝固(gù)的(dí)營養瓊(qióng)脂平板(bǎn)上，然後(hòu)用無(wú)菌(jūn)的(dí)玻璃(lí)刮刀把(bǎ)稀釋液(yè)均匀地(dì)塗布在培養基表麵上，經(jīng)恒(héng)溫培(péi)養便可以(yǐ)得到單個菌落。

３，平板(bǎn)劃綫法

簡(jiǎn)單的分離(lí)微生物的方法是平板(bǎn)劃(huá)綫(xiàn)法。用無菌的接種環(huán)取(qǔ)培(péi)養(yǎng)物少(shǎo)許(xǔ)在平板上進(jìn)行劃綫。劃(huá)綫(xiàn)的(dí)方法(fǎ)很(hěn)多(duō)，常見的比較(jiào)容易出現單(dān)個菌落的劃綫方法有斜(xié)綫(xiàn)法，曲(qū)綫法，方(fāng)格法(fǎ)，放(fàng)射(shè)法，四(sì)格(gé)法(fǎ)等。當接種(zhǒng)環在(zài)培養基表(biǎo)麵(miàn)上往後移動時，接(jiē)種環上(shàng)的菌液(yè)逐漸稀釋，最後(hòu)在(zài)所劃(huá)的綫上(shàng)分散(sàn)著單個細胞(bāo)，經(jīng)培養，每一個細胞長(cháng)成一個菌落(là)。

４，富集培養(yǎng)法

富(fù)集培養法的方法(fǎ)和(hé)原理非(fēi)常簡單。我(wǒ)們可以創(chuàng)造一些條件(jiàn)隻讓所需(xū)的微生(shēng)物生長(cháng)，在(zài)這些條(tiáo)件(jiàn)下，所需(xū)要的(dí)微生物能(néng)有(yǒu)效地與其他(tā)微生(shēng)物(wù)進行競(jìng)爭，在(zài)生長能力方(fāng)麵遠(yuǎn)遠超過其(qí)他微生(shēng)物。如果要分(fēn)離(lí)一些專性寄(jì)生菌，就必須把樣(yàng)品接(jiē)種到(dào)相(xiāng)應敏(mǐn)感宿主細胞(bāo)群(qún)體(tǐ)中，使(shǐ)其(qí)大(dà)量生長(cháng)。通過(guò)多次重復移(yí)種便可以得(dé)到純(chún)的(dí)寄(jì)生菌。

５，厭氧(yǎng)法

在實驗(yàn)室(shì)中(zhōng)，為(wéi)了分(fēn)離(lí)某些厭氧(yǎng)菌，可以利(lì)用(yòng)裝有原培(péi)養(yǎng)基的(dí)試管(guǎn)作為培養容(róng)器(qì)，把(bǎ)這支試(shì)管放在(zài)沸水浴(yù)中加熱(rè)數分鐘，以便(biàn)逐(zhú)出(chū)培養基(jī)中的溶解氧。然(rán)後(hòu)快速(sù)冷卻，並(bìng)進(jìn)行接種。接(jiē)種後，加入(rù)無(wú)菌的(dí)石(shí)蠟於培(péi)養基表(biǎo)麵(miàn)，使(shǐ)培(péi)養基(jī)與(yǔ)空氣(qì)隔(gé)絕。另(lìng)一(yī)種(zhǒng)方法是，在接種後(hòu)，利(lì)用N2或CO2取代培(péi)養基中的氣(qì)體，然後(hòu)在(zài)火焰上(shàng)把(bǎ)試管口(kǒu)密(mì)封。有時為(wéi)了更(gēng)有(yǒu)效地(dì)分離某(mǒu)些厭氧菌(jūn)，可以(yǐ)把所(suǒ)分離(lí)的樣品(pǐn)接種於培養(yǎng)基(jī)上(shàng)，然(rán)後(hòu)再(zài)把(bǎ)培(péi)養皿放(fàng)在*密封(fēng)的厭(yàn)氧(yǎng)培養(yǎng)裝置中。

6，單細胞（或(huò)單(dān)孢子(zǐ)）分(fēn)離法

是采(cǎi)取顯(xiǎn)微分離(lí)法(fǎ)從混雜(zá)群體(tǐ)中(zhōng)直接分(fēn)離單個(gè)細胞(bāo)或單(dān)個個(gè)體進(jìn)行培(péi)養以獲(huò)得(dé)純(chún)培(péi)養(yǎng)。較(jiào)大的微(wēi)生物，可(kě)采用(yòng)毛細管提(tí)取單個個(gè)體。個(gè)體相(xiāng)對較小的(dí)微生(shēng)物(wù)，需(xū)采用(yòng)顯(xiǎn)微(wēi)操作儀(yí)，在顯微(wēi)鏡下用毛(máo)細(xì)管或顯微針，鉤(gōu)，環等挑(tiāo)取單個(gè)微(wēi)生物(wù)細胞或(huò)孢子以獲得純培養(yǎng)。單(dān)細(xì)胞分離(lí)法(fǎ)對(duì)操作技術有比(bǐ)較高的(dí)要(yào)求。

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